Широко используется фермент Taq с горячим стартом.По сравнению с обычной ДНК-полимеразой, фермент Taq с горячим стартом может эффективно избежать некоторой неспецифической амплификации и образования димеров праймеров, а также может эффективно повысить вероятность успеха амплификации гена-мишени.Особенно в области генетического тестирования фермент Taq с горячим стартом был определен в качестве обязательного стандарта в отрасли, и обычная ДНК-полимераза не должна использоваться.Как видно из вышеизложенного, широко используются ферменты Taq горячего старта.В настоящее время на отечественном рынке представлено много марок ферментов Taq с горячим стартом, но ферментов Taq с горячим стартом высокого качества не так много.Столкнувшись с таким количеством ферментных продуктов Taq с горячим стартом, что нам выбрать?
1. Выберите фермент Taq с горячим стартом с высокой эффективностью амплификации.
Эффективность амплификации ПЦР тесно связана с эффективностью фермента Taq.После оптимизации хорошей реакционной системы фермента Taq эффективность амплификации превышает 95%, а диапазон амплификации исходного количества матрицы широк.Удовлетворительная амплификация может быть получена, когда содержание целевого гена низкое, и его нелегко отравить, когда количество матрицы велико, а период экспоненциальной амплификации длительный.Для фермента Taq с низкой производительностью, даже если реакционная система оптимизировалась много раз, эффективность амплификации все еще меньше 90%, S-образная форма кривой амплификации не очевидна, наклон небольшой, а кривая плоская.Когда количество шаблона мало, его нельзя усилить, а когда количество шаблона велико, эффект усиления не идеален.Поэтому выбор ДНК-полимераз с высокой эффективностью амплификации имеет решающее значение для успеха ПЦР и количественной ПЦР.
2. Выберите фермент Taq с горячим стартом с высокой ферментативной силой.
Ферментативная сила фермента Taq связана с эффективностью амплификации.Как правило, чем сильнее ферментативная сила фермента Taq с горячим стартом, тем длиннее период экспоненциального роста амплификации ПЦР, более типична «S-образная» кривая, выше значение сигнала флуоресценции и тем больше подходит для мультиплексной ПЦР-детекции. .Фирменные ДНК-полимеразы со слабой ферментативной активностью обычно могут поддерживать только 2-плексные реакции.При выполнении 3-плексных реакций кривая амплификации низкая, значение сигнала флуоресценции низкое, и нет типичной кривой амплификации, поэтому результаты трудно оценить.
3. Выберите фермент Taq с горячим стартом и высокой чувствительностью.
Вообще говоря, ДНК-полимераза обладает высокой эффективностью амплификации и высокой чувствительностью, но есть и несоответствия.Если количество целевого гена в амплифицируемом образце низкое, рекомендуется проверить чувствительность амплификации фермента Taq.Наиболее распространенный метод обнаружения заключается в проведении 10-кратного или 5-кратного градиентного разведения фрагмента плазмиды целевого гена, проведении ПЦР-детекции при более низком разведении и выборе фермента Taq с горячим стартом с более высокой чувствительностью обнаружения.
Из вышеизложенного видно, что исследователям необходимо выбирать в соответствии со своими экспериментальными требованиями и условиями финансирования.Лучше всего провести эксперимент по амплификации с градиентным разбавлением, чтобы определить эффективность амплификации и чувствительность фермента Taq с горячим стартом.
Пример Foregene'ДНК-полимераза Taq:
ДНК-полимераза Foreasy HS Taq
Описание
ДНК-полимераза Foreasy HS Taq представляет собой ДНК-полимеразу, экспрессируемую в инженерных бактериях Escherichia coli с помощью технологии рекомбинации генов.Фермент сочетается с уникальным реакционным буфером, что делает продукт очень устойчивым и совместимым, и позволяет напрямую использовать лизат образца (система Foregene Lysis) в качестве матрицы для реакций обнаружения.
Заявление
Качественная ПЦР и количественная ПЦР-обнаружение очищенных и неочищенных матриц.
Контроль качества
1. Экзогенная нуклеазная активность не обнаружена.
2. Метод ПЦР для обнаружения остаточной геномной ДНК без хозяина
3. Он может эффективно усиливать однокопийные гены в геноме человека.
4. Хранить при комнатной температуре в течение недели, без очевидных изменений активности.
Ваше сообщение должно содержать от 20 до 3000 символов!
