КАК УЛУЧШИТЬ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТРАНСКРИПЦИИ ОБРАТНОГО LNCRNA?

Руководство

Длинная РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА не-кодирвоания, lncRNA РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА не-кодирвоания с нуклеотидами длины большими чем 200, вообще между nt 200-100000. lncRNA регулирует экспрессию гена на эпигеномном, транскрипции и пост-transcriptional уровнях, и участвует в x хромосоме заставляя замолчать, геноме отпечатывая и изменение хроматина, активация транскрипции, взаимодействие транскрипции, ядерный переход, регулировка цикла клетки, регулировка дифференцирования клетки, и эффекты компенсации дозы (эффект компенсации дозировки) и много других важных регулированных процессов близко связаны с возникновением, развитием и предохранением человеческих заболеваний, и в настоящее время одна из горячих точек в поле биомедицина.

01 типы и характеристика LncRNA

lncRNA разделено в много типов согласно различным источникам своего образования, как показано в диаграмме выше. Имеет следующие характеристики:

1. lncRNAs обычно более длинны, с динамическим выражением и различными соединяя методами во время дифференцирования
2. сравненный с кодировать гены, lncRNA обычно имеет более низкий уровень выражения
3. Большинств lncRNAs имеют очевидную височную и пространственную характерность выражения в процессе дифференцирования и развития ткани
4. Характерные выражения в опухолях и других заболеваниях
5. Субцеллюлярные положения lncRNA разнообразны
6. Последовательность низка в консервации, но функция имеет некоторую степень консервации, etc.

02 вопросы и ответы о транскрипции обратного LncRNA

Должный к низкому содержанию lncRNA в клетках, длинной длине и высокопоставленной структуре, такая РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА часто имеет сложные структуры как петли или hairpins стержня, и RT-qPCR прональн к проблемам неудачных обратных транскрипции или низкой эффективности.

Решение транскрипции обратного 03 LncRNA

В центральном правиле, процесс вирусов РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ используя их собственное обратное transcriptase для того чтобы синтезировать ДНК используя РИБОНУКЛЕИНОВУЮ КИСЛОТУ по мере того как шаблон вызван обратной транскрипцией. Процесс использования transcriptase вируса РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ обратного для того чтобы синтезировать шаблон cDNA in vitro вызван обратной транскрипцией. Основные элементы включили в обратной системе транскрипции: Шаблон РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, обратное transcriptase, праймеры и другие компоненты.

Шаблон 1.RNA

Влияние шаблона РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ на обратной транскрипции отражено в своих структуре, очищенности и целостности. Высокий очищенность и целостность извлеченной РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, высокий эффективность обратной транскрипции и более точный последующие количественные результаты. РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА очищенная обыкновенно используемыми реагентами извлечения РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ часто содержит выпарки солей алкоголя и гуанидина, которые имеют сильное inhibitory влияние на большинств обратном transcriptase.

transcriptase 2.Reverse

Обратное transcriptase имеет ключевое влияние во всей обратной системе транскрипции. Соответствующая температура для обратного transcriptase используемого в большинств лабораториях вообще 42°C. на самом деле, отверстие высокопоставленной структуры РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ требует более высокой температуры, и требования для обратного transcriptase выше.

3.Primer

Обратные праймеры транскрипции включают Джин-специфические праймеры, случайные праймеры и Oligo праймеры dT. Большинств lncRNAs не содержат кабели polyA, и важно как следует соответствовать случайным праймерам Oligo dT.

компоненты 4.Other

В представлении факта, что РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА особенно легка для того чтобы ухудшить, введение компонентов в обратной системе транскрипции можно уменьшить, которая может эффектно предотвратить вход рНКазы и обеспечить ровный прогресс обратной транскрипции.

Foregene получает от шаблона РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, обратная транскрипция к qPCR всесторонне сопровождает ваше обнаружение lncRNA

Животный полный набор изоляции РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ (с столбцом удаления gDNA)

Набор изоляции РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ клетки полный (с столбцом удаления gDNA)

Lnc-RT HeroTM i (с gDNase) (супер примикс для синтеза cDNA перво-стренги от lncRNA)

Зеленый цвет в реальном времени I PCR EasyTM-SYBR

Преимущества извлечения РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ:

Набор использует третьего поколения технологию извлечения РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, никакую потребность использовать DNase.

11 минута от хорошей плиты 96, 24, 12, и 6 выросли в питательной среде клетки, извлечение высокой эффективности свободной от gDNA, высокочистой, высококачественной полной РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ клетки.

Преимущества транскрипции lncRNA обратной:

Обратная система транскрипции специально начатая для LncRNA быстро для того чтобы извлечь генное загрязнение ДНК.

Обратная система транскрипции имеет высокую термическую стабильность и все еще имеет хорошее обратное представление транскрипции на 50°C.

Шаблоны с высоким содержанием ОБЩЕГО РУКОВОДСТВА и сложной вторичной структурой можно обратить с высокой эффективностью.

Преимущества qPCR:

Полимераза Foregene Taq горячего начала имеет более высокую эффективность амплификации, более высокую чувствительность амплификации, и более высокую характерность амплификации.

Оптимизированное реальное смешивание PCR легкое делает зеленый цвет SYBR я имею более высокую чувствительность обнаружения, и своя интенсивность флуоресцирования 3-5 раз это из подобных продуктов, которые могут отвечать потребностямы разных видов экспериментов по флуоресцирования количественных.