RT-QPCR EasyTM Taqman одно смешивание в реальном времени шага RT-PCR мастерское

RT-qPCR EasyTM (один шаг) - Taqman

Для PCR в реальном времени используя cDNA, очистил ДНК

Внедрение продукции

Продукты серии Foregene одношаговые RT-PCR легкие осуществляют что интегрированная реакция от РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ к, который двух-сели на мель ДНК, т.е., обратить транскрипцию и амплификация PCR завершены в такой же трубке центрифуги реакции и такой же системе реакции, таким образом экспириментально упрощенные шаги, экспириментально план оптимизировали, и экспириментально эффективность улучшила.

RT-qPCR EasyTM (один шаг) - Taqman используя полимеразу ДНК Foregene HotStar Taq, оптимизированная система qPCR Taqman смогите быстро и специфически выполнить количественное обнаружение RT-qPCR в реальном времени шаблонов РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ трассировки.

Условия перехода и хранения

• Условия транспорта: Весь процесс транспортирован в низкотемпературную коробку льда для обеспечения что набор в государстве <4>
• Условия хранения: Набор хранится на -20℃. Храните продукт в холодильнике температуры постоянного на -20℃ немедленно после получения. Если условия хранения соотвествующие, то продукт не ухудшит никакое представление во время периода ценности 1 года.

Данные по набора компонентные

• Смешивание-Taqman 2× RT-qPCR EasyTM: Обратный Transcriptase Foregene, и АБС битор рНКазы, полимераза ДНК Foregene HotStar Taq, оптимизированный коэффициент dNTPs, Mg2+, стабилизатора, усиливающего агента, и оптимизатора.
• Краска ссылки ROX: Вообще использованный на cyclers в реальном времени PCR термальных компаний как ABI, Stratagene, etc., для того чтобы отрегулировать разницу среди трубок PCR причиненных ошибками загрузки образца PCR. Концентрация краски ссылки ROX необходима различными аппаратурами другая, и потребитель может добавить его согласно порекомендованной концентрации аппаратуры.

Меры предосторожности:

реагенты u должны избежать повторенный замерзать и таять, в противном случае представление реагентов уменьшит или станет инвалидным.

u реагенты в наборе следует быть защищен от света и сохранен на -20°C.

u порекомендованы, что использует свежие хранят извлечение образца или РИБОНУКЛЕИНОВУЮ КИСЛОТУ шаблона, который на -80°C (РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА должна избежать повторенный замерзать и таять).

загрязнение рНКазы u во избежание, пожалуйста выполняет эксперимент в свободном от РНКаз космосе; подсказки пипетки и используемые трубки PCR должны быть свободны от РНКаз; и несите устранимые перчатки и маски.

u этот набор необходимо использовать со специфическими праймерами для экспериментов. Пожалуйста выберите специфические праймеры для гена быть усиленным согласно потребностям эксперимента.

u перед использованием, положил смешивание-Taqman 2× RT-qPCR EasyTM на лед совершенно для того чтобы расплавить, щелчок и смешивание задолго до того пользы; подготовка системы следует эксплуатирова на ванне льда для того чтобы улучшить представление набора и увеличить амплификацию PCR.

Концентрация РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ шаблона

RT-qPCR EasyTM (один шаг) - Taqman: (1 РИБОНУКЛЕИНОВАЯ КИСЛОТА итога ng pg-100 система)/20 μl.

Проводник деятельности

: Подготовка материалов и реагентов

• Подготовьте подготовленный шаблон РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ (порекомендованы, что использует наборы серии набора изоляции РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ итога Foregene для извлечения и для того чтобы очистить РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ), специфические праймеры (μM 10) и связанные потребляемые вещества и аппаратуры.

Примечание: Пожалуйста обеспечьте целостность РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ и попробуйте использовать РИБОНУКЛЕИНОВУЮ КИСЛОТУ извлеченную от свежих образцов.

• Положенное смешивание-Taqman 2× RT-qPCR EasyTM, свободная от РНКаз краска ссылки ddH2O, и 20× ROX (при необходимости) на льде для того чтобы позволить ей расплавить естественно, и щелчку стена трубки к смешиванию до пользы.

B: Подготовка системы RT-qPCR

Смешивание-Taqman 2× RT-qPCR EasyTM удобно и быстро для использования, и избегает загрязнения во время деятельности и экспириментально ошибок причиненных множественными подготовками системы реакции в наибольшей степени. При использовании, только половина тома системы реакции (например, если система реакции μl 20, то примите 10 решение смешивания-Taqman μl 2× RT-qPCR EasyTM), добавляет соотвествующее количество шаблона РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ и специфических праймеров, и добавляет свободное от РНКаз ddH2O для того чтобы составить том. Специфическая подготовка системы реакции RT-qPCR может сослаться на таблицу 1 ниже.

Таблица 1: Подготовка системы RT-qPCR

Примечание: Передний праймер и обратный праймер специфические праймеры для гена цели. Систему qPCR можно отрегулировать согласно экспириментально потребностям и модели PCR. Для окончательной концентрации большинств праймеров, мы рекомендуем 400nM. Пожалуйста отрегулируйте дозировку специфических праймера и зонда согласно подготовленной концентрации согласно нашей порекомендованной окончательной концентрации. Для qPCR с системой 50μl, пожалуйста см. система 20μl для того чтобы отрегулировать количество реагентов пропорционально.

1*: Выберите соотвествующую окончательную концентрацию краски ссылки ROX согласно различным количественным аппаратурам PCR. Оптимальная концентрация краски ссылки ROX для общих количественных машин PCR показана в следующей таблице:

C: Установка системы реакции RT-qPCR

• После подготовки системы RT-qPCR со ссылкой на вышеуказанную таблицу, смешивание нежной (вы можете использовать подсказку пипетки к нежно пипетке; вы можете также смешать на vortexer и центрифуге кратко для того чтобы собрать жидкость разбросанную на стену трубки или крышку трубки, и месте на коробке льда для последующего использования).
• См. установки программы реакции RT-qPCR (таблица 2) для того чтобы установить температуру и время реакции.

Примечание: Для обеспечения работы смешивания-Taqman 2× RT-qPCR EasyTM и для того чтобы улучшить свою эффективность амплификации, самое лучшее подготовить систему реакции RT-qPCR после настраивать программу аппаратуры PCR, так, что программу реакции можно вписать немедленно после подготовка системы будет выполнена.

• Для того чтобы получить самое лучшее влияние qPCR, PCR градиента можно использовать для того чтобы оптимизировать условия реакции для различных шаблонов и различных праймеров.

Примечание: Диапазон температур расширения полимеразы ДНК Foregene Hotstar Taq обеспечил в этом наборе является следующим: 60-72℃, и самая лучшая температура расширения 72℃.

Последователи пример условий реакции RT-qPCR. Порекомендованы, что использует метод 2-шага для реакции PCR. Когда концентрация шаблона слишком низка для того чтобы причинить неспецифичную амплификацию, низкое значение Tm праймера водит к низкой эффективности амплификации или плохая повторимость кривой усиления, etc., порекомендованы, что пробует метод 3-шага для реакции PCR. См. таблица 2-1 (метод 2-шага) и таблица 2-2 (метод 3-шага) для установки условий реакции RT-qPCR.

Таблица 2-1: Устанавливать программы реакции RT-qPCR (метод 2-шага)

Таблица 2-2: Устанавливать программы реакции RT-qPCR (метод 3-шага)

1*: Обратное время транскрипции можно отрегулировать согласно экспириментально потребностям. Общим эндогенным генам как β-актин только нужны 10 минут; обнаружить специфические выраженные гены, обратное время транскрипции может быть соотвественно увеличивать как необходимо.

2*: Установите специфическое временя согласно длине усиленной части цели. Скорость амплификации полимеразы ДНК Foregene HotStar Taq 2kb/min

Примечание: Порекомендованы, что используют условия реакции PCR меняют в зависимости от структурных условий шаблона, праймеров, etc. для шаблонов РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ со сложными вторичными структурами, его 42℃ для первого шага обратной транскрипции. В специфической деятельности, необходимо конструировать оптимальные условия реакции согласно специфическим условиям как размер части цели, низкопробная последовательность усиленной части и содержание ОБЩЕГО РУКОВОДСТВА и длина праймера, включая температуру нагрева при отжиге, время расширения, etc.

Производственный поток: